Posted by on 12 września 2018

Ponadto, spektroskopia 1H-NMR zidentyfikowała markery metaboliczne, które wskazywały na dysfunkcję mitochondrialną (Figura 1D i Tabela Analizy genetyczne
Rysunek 2. Rysunek 2. Wyniki badań sprzężeń i analiza sekwencji. Panel A pokazuje wyniki wielopunktowej analizy parametrycznego wiązania dla chromosomu 3. Wystąpiło wyraźne i znaczące połączenie (wynik LOD, 3,61) w zakresie 200 cM. Panel B pokazuje rekonstrukcję haplotypu dla rodziny w tym locus, z segregacją allelu choroby (pokazanego na pomarańczowo, D3S3583-D3S2747) u wszystkich dotkniętych członków rodziny. Inne kolory reprezentują inne haplotypy. Panel C przedstawia oryginalne chromatogramy sekwencji dla części eksonu EHHADH dla chorego członka rodziny (pacjenta) i jej nienaruszonego potomstwa (kontrola). Na chromatogramie pacjenta znajduje się heterozygotyczna mutacja missense, c.7G . A (GAG . AAG; p.E3K) (strzałka). Panel D pokazuje wykres wyrównania białka (homologii) pierwszych 25 aminokwasów EHHADH w 11 kręgach z pełną ochroną locus E3 (strzałka).
Przeprowadziliśmy analizę sprzężeń genetycznych i znaleźliśmy znaczące powiązanie w jednym regionie (wynik LOD> 3); choroba jest segregowana w sposób autosomalny dominujący z haplotypem na chromosomie 3q27 (Figura 2A). Ten haplotyp, wspólny dla wszystkich członków rodziny dotkniętych chorobą i nieodnaleziony u żadnego z nietkniętych członków, był flankowany przez markery D3S3583 i D3S2747 (Figura 2B). Poprzez sekwencjonowanie wszystkich znanych genów (kodujących i niekodujących eksonów i miejsc składania) w tym połączonym regionie, zidentyfikowaliśmy pojedynczą mutację heterozygotyczną missense (c.7G . A, p.E3K) w EHHADH (Figura 2C). Mutacja była całkowicie oddzielona od wszystkich osób dotkniętych chorobą i była nieobecna u niedotkniętych krewnych, czarnej kontroli i wszystkich dostępnych baz danych. Ta heterozygotyczna zmiana wysoce konserwatywnego glutaminianu na lizynę w pozycji trzeciego aminokwasu EHHADH (Figura 2C i 2D) przewidywała utworzenie de novo N-końcowego motywu celowania mitochondrialnego w tym białku peroksysomalnym (Fig. S3 w Dodatku dodatkowym) .17
Badania na komórki
Zastosowaliśmy komórki LLC-PK1, które były trwale transfekowane normalnym lub zmutowanym EHHADH jako model komórkowy do badania funkcji i morfologii kanalika proksymalnego. Kontrolny (niezmutujący) EHHADH umiejscowiony tylko do peroksysomów. Jednak, jak przewidziano w naszych analizach bioinformatycznych, zmutowany EHHADH umiejscowił się w mitochondriach, a także w peroksyzomach, co zostało potwierdzone przez kolokalizację za pomocą ustalonego markera mitochondrialnego. Lokalizacja w mitochondriach, oprócz peroksysomów, obserwowano również w komórkach COS-7 i ludzkich embrionalnych komórkach nerkowych 293 (HEK293)
[podobne: darmowe leki dla seniorow, jak oddać szpik, sonoforeza wskazania ]

Powiązane tematy z artykułem: darmowe leki dla seniorow jak oddać szpik sonoforeza wskazania

Posted by on 12 września 2018

Ponadto, spektroskopia 1H-NMR zidentyfikowała markery metaboliczne, które wskazywały na dysfunkcję mitochondrialną (Figura 1D i Tabela Analizy genetyczne
Rysunek 2. Rysunek 2. Wyniki badań sprzężeń i analiza sekwencji. Panel A pokazuje wyniki wielopunktowej analizy parametrycznego wiązania dla chromosomu 3. Wystąpiło wyraźne i znaczące połączenie (wynik LOD, 3,61) w zakresie 200 cM. Panel B pokazuje rekonstrukcję haplotypu dla rodziny w tym locus, z segregacją allelu choroby (pokazanego na pomarańczowo, D3S3583-D3S2747) u wszystkich dotkniętych członków rodziny. Inne kolory reprezentują inne haplotypy. Panel C przedstawia oryginalne chromatogramy sekwencji dla części eksonu EHHADH dla chorego członka rodziny (pacjenta) i jej nienaruszonego potomstwa (kontrola). Na chromatogramie pacjenta znajduje się heterozygotyczna mutacja missense, c.7G . A (GAG . AAG; p.E3K) (strzałka). Panel D pokazuje wykres wyrównania białka (homologii) pierwszych 25 aminokwasów EHHADH w 11 kręgach z pełną ochroną locus E3 (strzałka).
Przeprowadziliśmy analizę sprzężeń genetycznych i znaleźliśmy znaczące powiązanie w jednym regionie (wynik LOD> 3); choroba jest segregowana w sposób autosomalny dominujący z haplotypem na chromosomie 3q27 (Figura 2A). Ten haplotyp, wspólny dla wszystkich członków rodziny dotkniętych chorobą i nieodnaleziony u żadnego z nietkniętych członków, był flankowany przez markery D3S3583 i D3S2747 (Figura 2B). Poprzez sekwencjonowanie wszystkich znanych genów (kodujących i niekodujących eksonów i miejsc składania) w tym połączonym regionie, zidentyfikowaliśmy pojedynczą mutację heterozygotyczną missense (c.7G . A, p.E3K) w EHHADH (Figura 2C). Mutacja była całkowicie oddzielona od wszystkich osób dotkniętych chorobą i była nieobecna u niedotkniętych krewnych, czarnej kontroli i wszystkich dostępnych baz danych. Ta heterozygotyczna zmiana wysoce konserwatywnego glutaminianu na lizynę w pozycji trzeciego aminokwasu EHHADH (Figura 2C i 2D) przewidywała utworzenie de novo N-końcowego motywu celowania mitochondrialnego w tym białku peroksysomalnym (Fig. S3 w Dodatku dodatkowym) .17
Badania na komórki
Zastosowaliśmy komórki LLC-PK1, które były trwale transfekowane normalnym lub zmutowanym EHHADH jako model komórkowy do badania funkcji i morfologii kanalika proksymalnego. Kontrolny (niezmutujący) EHHADH umiejscowiony tylko do peroksysomów. Jednak, jak przewidziano w naszych analizach bioinformatycznych, zmutowany EHHADH umiejscowił się w mitochondriach, a także w peroksyzomach, co zostało potwierdzone przez kolokalizację za pomocą ustalonego markera mitochondrialnego. Lokalizacja w mitochondriach, oprócz peroksysomów, obserwowano również w komórkach COS-7 i ludzkich embrionalnych komórkach nerkowych 293 (HEK293)
[podobne: darmowe leki dla seniorow, jak oddać szpik, sonoforeza wskazania ]

Powiązane tematy z artykułem: darmowe leki dla seniorow jak oddać szpik sonoforeza wskazania